选择荧光蛋白的8个重要参数

自绿色荧光蛋白被发现后，陆陆续续有多种颜色的荧光蛋白被发现，并应用于生物研究室研究。怎么选择适合自己的荧光蛋白研究呢？请参考以下8个因素：深圳荧鸿仅为整理者，以下内容仅供参考。关于荧光蛋白激发光源，请咨询0755-89233889！

（1） 激发波长/发射波长：每一种荧光蛋白都有其独特的激发波长和发射波长，因此，选择的荧光蛋白必须是手上系统能够激发和检测到。举例，你的显微镜只有两个激发器，488 nm和561 nm，那你就不能够选择远红外荧光蛋白。又比如当使用不止一个荧光蛋白时，确保他们的发射波长没有重叠。深圳荧鸿激发光源有单色、双色、多色可供选择。

（2） 寡聚反应：第一代荧光蛋白易于寡聚化，当和目的基因融合表达是，可能会影响目的基因蛋白的生物学功能。因此建议使用单体的荧光蛋白，比如mCherry。

（3） 氧气：许多荧光蛋白的成熟需要氧气，特别是衍生自GFP的那些荧光蛋白。如果这些荧光蛋白处于缺氧环境，那可能就观察不到荧光。

（4） 成熟时间：成熟时间是荧光蛋白正确折叠和产生发色团所需的时间。时间可能是几分钟到几小时，举例superfolder GFP (sfGFP) 和mNeonGFP在37 °C所需时间小于10min；mCherry 需要大概15 min； TagRFP 需要大概100 min；DsRed 大概需要10 hours。

（5） 温度：温度会影响荧光蛋白的成熟时间和荧光强度，比如EGFP适合37 °C，所以EGFP最适合哺乳动物或者细菌的研究，而GFPS65T相对适合酵母的研究。

（6） 亮度：荧光蛋白的亮度值由消光系数与量子产率的乘积计算得出。在许多情况下，将荧光蛋白的亮度与EGFP(设定为1)进行比较，有一些荧光蛋白非常暗淡（例如TagRFP657，其具有亮度只有0.1），因此亮度也需要考虑。

（7） 耐光性：长时间暴露在激发光下，荧光分子被漂白（即失去发光的能力）。光稳定性可短至100毫秒（如EBFP）或长达1小时（如mAmetrine1.2）。但是，对于大多数荧光蛋白来说，它只需几秒钟到几分钟。另外，光稳定性可能也会受实验参数影响，例如激发光强度，pH或温度等。

 

（8） pH稳定性：如果计划在酸性环境中表达荧光蛋白，则此参数非常重要，一些荧光蛋白具有不同的ex/em光谱（例如mKeima）或在pH变化时荧光强度会发生改变（例如pHluorin，pHTomato）。