荧光蛋白激发光源观察动植物荧光蛋白GFP的3种方法

绿色荧光蛋白GFP收到紫外线或者是蓝光激发时，出现绿色荧光，荧光稳定检测方便，而且荧光受外界影响小，对细胞的伤害小，因此常被广泛应用于活体报告蛋白。

一般观察绿色荧光蛋白GFP的方法有

1）激发光源ULV450观察

激发光源ULV450能够激发GFP发出明亮的绿色荧光，激发光源ULV450为蓝色光纤，在观察gfp荧光时，佩戴专业的观察眼镜才能观察到清晰的荧光信号。

2)荧光显微镜观察

荧光显微镜是以紫外线为光源， 用以照射被检物体，使之发出荧光，然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。 细胞中有些物质，如叶绿素等，受紫外线照射后可发荧光；另有一些物质本身虽不能发荧光，但如果用荧光染料或荧光抗体染色后，经紫外线照射亦可发荧光，荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工具之一。目前在常用的方法就是采用荧光显微镜观察，荧光显微镜在实验室普及，但不足的是必须采集叶片或动物切片进行观察，对培养的标本进行破坏，无法进行活体观察。

 

3)紫外光源观察

采用紫外线灯（又叫黑光灯）观察也非常方便，但如果观察植物，植物叶片的叶绿色在紫外线灯下也会发出荧光，对gfp发出的荧光也会产生干扰，另外，标本长时间在紫外光源照射下对GFP标本组织也会造成破坏。365nm的紫外线灯照射植物叶片，叶片的叶绿素在紫外线作用下会发红光，而GFP荧光蛋白在紫外线激发下发出的是510nm青绿色的荧光，红色和青绿色混在一起，会变成黄色，所以，用紫外光源照射叶片上黄色部位有可能就是GFP表达的位置

 

三种方法中激发光源是最直接，最方便的，同时效果也很好。激发光源ULV450为小型手电筒样式，锂电池供电，轻巧容易携带。根据GFP的荧光特性，我们可以用激发光源ULV450检测转绿色荧光蛋白（GFP）基因、红色荧光蛋白（DsRed）；检测基因植物：水稻、小麦、玉米、大豆、棉花、拟南芥；检测转GFP、DsRed基因动物：小鼠、兔子、猴子等；检测转GFP、DsRed基因微生物：细菌、真菌、酵母等检测GFP、DsRed基因组织特异性表达；