选择荧光蛋白的8个重要参数

选择荧光蛋白的8个重要参数

时间:2020-11-23 编辑:荧鸿科技

自绿色荧光蛋白被发现后,陆陆续续有多种颜色的荧光蛋白被发现,并应用于生物研究室研究。怎么选择适合自己的荧光蛋白研究呢?请参考以下8个因素:深圳荧鸿仅为整理者,以下内容仅供参考。关于荧光蛋白激发光源,请咨询0755-89233889!

(1) 激发波长/发射波长:每一种荧光蛋白都有其独特的激发波长和发射波长,因此,选择的荧光蛋白必须是手上系统能够激发和检测到。举例,你的显微镜只有两个激发器,488 nm和561 nm,那你就不能够选择远红外荧光蛋白。又比如当使用不止一个荧光蛋白时,确保他们的发射波长没有重叠。深圳荧鸿激发光源有单色、双色、多色可供选择。

(2) 寡聚反应:第一代荧光蛋白易于寡聚化,当和目的基因融合表达是,可能会影响目的基因蛋白的生物学功能。因此建议使用单体的荧光蛋白,比如mCherry。

(3) 氧气:许多荧光蛋白的成熟需要氧气,特别是衍生自GFP的那些荧光蛋白。如果这些荧光蛋白处于缺氧环境,那可能就观察不到荧光。

(4) 成熟时间:成熟时间是荧光蛋白正确折叠和产生发色团所需的时间。时间可能是几分钟到几小时,举例superfolder GFP (sfGFP) 和mNeonGFP在37 °C所需时间小于10min;mCherry 需要大概15 min; TagRFP 需要大概100 min;DsRed 大概需要10 hours。

(5) 温度:温度会影响荧光蛋白的成熟时间和荧光强度,比如EGFP适合37 °C,所以EGFP最适合哺乳动物或者细菌的研究,而GFPS65T相对适合酵母的研究。

(6) 亮度:荧光蛋白的亮度值由消光系数与量子产率的乘积计算得出。在许多情况下,将荧光蛋白的亮度与EGFP(设定为1)进行比较,有一些荧光蛋白非常暗淡(例如TagRFP657,其具有亮度只有0.1),因此亮度也需要考虑。

(7) 耐光性:长时间暴露在激发光下,荧光分子被漂白(即失去发光的能力)。光稳定性可短至100毫秒(如EBFP)或长达1小时(如mAmetrine1.2)。但是,对于大多数荧光蛋白来说,它只需几秒钟到几分钟。另外,光稳定性可能也会受实验参数影响,例如激发光强度,pH或温度等。

 

(8) pH稳定性:如果计划在酸性环境中表达荧光蛋白,则此参数非常重要,一些荧光蛋白具有不同的ex/em光谱(例如mKeima)或在pH变化时荧光强度会发生改变(例如pHluorin,pHTomato)。

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