荧光蛋白GFP+激发光源的应用特点

荧光蛋白GFP+激发光源的应用特点

时间:2020-8-3 编辑:荧鸿科技

荧光蛋白GFP在激发光源的照射下,人眼能明显的看到荧光,而一起被广泛应用于各种生物研究,主要特性如下
1、易于检测
GFP荧光反应不需外加任何反应底物,酶或其他共反应银子,也就不存在这些物质可能难于进入细胞的问题,只需紫外线光或蓝光激发光源激发,即可发出绿色荧光,GFP发射的荧光用斗眼或用光显微镜就可以检测到。灵敏度高,对于单细胞水平的表达也可识别,同时还可利用其进行定量检测。由于GFP对活细胞基本无毒害,因此无需特殊处理就可以很方便进行活体观察。而且,具有不同光谱特性的GFP突变体的获得,使在同一细胞中同时分析两种不同蛋白或启动子成为可能,可以用于法语细胞学、药物筛选、分析诊断灯研究。这就使GFP有可能成为一种快速、简便、经济的标记蛋白,GFP基因作为报道基因有很广泛的用于。

2、荧光稳定
GFP无光漂白现象,在很大PH范围内(PH7-12)都可以正常发出荧光,手温度的影响也很小,只有在超过65℃时才会变性,即荧光消失。荧光显微镜强光照射下,GFP抗光漂白能力比荧光素强,特别是在450~490nm蓝光波长下更稳定,单在340-390nm或395-440nm范围内,仍会发生光漂白现象。对于长时间光照,GFP也有很好的耐受性,根据Sheen等的研究,GFP在受体内表达时可以持续得到不低于10min的荧光。

3、广谱性
首先表现在它的表达几乎不受种属范围的限制,在微生物、植物、动物中都获得了成功的表达;其次就是没有细胞种类和位置的限制,在各个部位都可以表达,在紫外线光或蓝光激发光源激发下发出肉眼可见的荧光。

4、易于载体构建
由于GFP较小,只含有238个氨基酸,编码GFP的基因序列也比较短,约2.6KB,所以他可以很方便的同其他序列一起构建多种质粒,而不至于使质粒过大影响转化频率。尽管野生型的GFP在某些植物和动物中表达很弱,但是可以通过更换GFP生色团氨基酸改变碱基组分、出去内含子、更换强启动子灯方法加强表达。Connack等筛选出三种含Ser65突变的突变体,在大肠杆菌中表达时,紫外线光或蓝光激发光源激发下的荧光强度比野生型高约100倍。

5、无毒害
Chalfie等的研究表明:GFP对生活细胞基本无毒害,Sheen等的研究进一步表明:在玉米中,即便GFP在细胞中的表达量很高时,对细胞也不会产生明显毒害,但是至今我们还不了解它对植物再生能力的影响。

本文资料来自网络,仅供参考,深圳荧鸿主要研究用于GFP激发的紫外线光/蓝光激发光源,关于这方面的疑问,请咨询0755-89233889。

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