GFP+激发光源在细胞生物学的十大应用

GFP+激发光源在细胞生物学的十大应用

时间:2020-11-2 编辑:荧鸿科技

GFP+激发光源在细胞生物学的应用具有易于检测、荧光稳定、广谱性、易于载体构建、无毒害诸多优点,因为在生物学应用广泛,深圳荧鸿激发光源为你简单整理10个应用:

1、对细胞生理过程监控

通过基因操作,蛋白与不同GFP进行融合,形成融合蛋白。通过融合蛋白在激发光源的照射下发出荧光特制,可以对相应蛋白的表达和转运以及生理反应进行监控。监控主要有:转移和定位、GFP光谱的生化修饰、荧光共振的能量转移。

2、细胞筛选

基于GFP能够吸收并在激发光源照射下发出荧光,并且荧光稳定以及检测方法快速、方便的特性,GFP在细胞筛选上广泛应用。如:应用流失细胞计数仪来筛选蛋白产量增强的细胞;使用GFP作为标记快速筛选出在生长抑制环境下仍能保持重组蛋白大量表达的CHO细胞;通过GFP荧光的减少,可以检测出鼠和人细胞的凋亡;利用GFP融合细胞作为细胞表面活体荧光标记,通过筛选已经获得GFP表达的E.coli、人体肾细胞和猿猴COS-1细胞灯特殊类型。

3、细胞亚结构及蛋白质分子的定位

相对于以前使用细胞分级分离和免疫细胞化学技术研究蛋白质移位,现在使用GFP融合蛋白显像技术更简便且可靠,既能更快又能更全面的对蛋白质的移动进行研究。如:对几个GFP突变体的检定,通过激发光源激发不同荧光,从而在活细胞中准备的区分多种不同荧光融合蛋白并了解他们的分布情况。

4、用于细胞内蛋白质的动力学研究

研究细胞内蛋白质相互作用的技术主要有:光漂白荧光恢复法(FRAP)、光漂白荧光损失法(FLIP)。FRAP主要是通过对细胞内特定的点或区域进行强烈的光照,使荧光发生光跑白作用,再通过相同时间间隔的光影像采样记录下荧光恢复的动力学过程。FLIP是对细胞的一个区域进行持续性的光漂白,再对光漂白区外的荧光的损失进行监控就可获得一些标记蛋白之间的相关性信息。另外一种可以用来研究细胞内返佣动力学的方法就是荧光相关性分光光镜检查。

5、计算细胞生长速度

在高水平组合型表达GFP的细胞品系中,在细胞生长的对数期。绿色荧光蛋白激发后所发出的荧光信号与细胞的数量密切相关。测量到的任何荧光强度都可以相应地转变为细胞浓度。尽管在细胞生长的后期,用荧光信号计算得到的细胞数目略低于培养物种的实际数目。但在常用的台盼蓝技术方法中,这些误差是允许的。利用这一技术,可以测定某些细胞的分布和生长状况,尤其是一些透明的动植物组织内特定细胞、化合物的生长、分布情况。也有人用此项技术进行病毒在植物体内的生长、扩散情况的研究,取得了不错的效果。

6、观察细胞内酶的活动

GFP不仅可以用来探测融合蛋白的空间定位,而且可以对活细胞的酶活动,如:磷酸化作用、蛋白水解作用灯进行报告,还可测量与酶活动相关的细胞内的pH、cAMP、Ca2+浓度。通过将外源系列插曲GFP基因中,可以对细胞内酶的活动进行观察以及了解这些酶的生理学参数。插入外源基因后所表达的融合蛋白中的GFP蛋白发色基团会发生构像改变,其发射的荧光的强度䧥发生很大的变化。这些指示剂可以用来检测细胞内许多酶的作用。例如:蛋白水解酶、激酶、氧化还原酶以及一些小配基的浓度。

7、用于细胞示踪实验研究

利用GFP的激发后发出荧光可以清楚地对肿瘤细胞的生长和转移进行追踪。体内肿瘤侵袭的研究要求在周围正常细胞背景下,能识别少量甚至是单个的瘤细胞。

8、基因表达调控

GFP作为一种活体报告蛋白,用于研究基因表达的调控,易于会提观测和检测。

9、定量分析

GFP的荧光强度很高,很容易用一起定量检测,而且研究表明GFP的荧光强度与其相连的细胞或蛋白有一定的相关性,只需要作出一条相关性曲线,就可以对研究队形进行定量的分析。

10、DFP报告蛋白用于细胞活体分离与纯化

利用细胞表面标记,通过流体细胞分光光度计或荧光活化细胞筛选仪可以分离与纯化特殊类型细胞,对分析cDNA文库、研究基因的细胞发育或组织专一性表达十分重要。利用GFP融合蛋白为细胞表面活体荧光标记,通过筛选已经获得GFP的表达的大肠杆菌、人体肾细胞和猿猴COS-1细胞特殊类型。

 

 

 

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