荧光蛋白激发光源观察动植物荧光蛋白GFP的3种方法

荧光蛋白激发光源观察动植物荧光蛋白GFP的3种方法

时间:2019-4-18 编辑:荧鸿科技

绿色荧光蛋白GFP收到紫外线或者是蓝光激发时,出现绿色荧光,荧光稳定检测方便,而且荧光受外界影响小,对细胞的伤害小,因此常被广泛应用于活体报告蛋白。

一般观察绿色荧光蛋白GFP的方法有

1)激发光源ULV450观察

激发光源ULV450能够激发GFP发出明亮的绿色荧光,激发光源ULV450为蓝色光纤,在观察gfp荧光时,佩戴专业的观察眼镜才能观察到清晰的荧光信号。

荧光蛋白激发光源观察动植物荧光蛋白GFP的3种方法

2)荧光显微镜观察

荧光显微镜是以紫外线为光源, 用以照射被检物体,使之发出荧光,然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。 细胞中有些物质,如叶绿素等,受紫外线照射后可发荧光;另有一些物质本身虽不能发荧光,但如果用荧光染料或荧光抗体染色后,经紫外线照射亦可发荧光,荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工具之一。目前在常用的方法就是采用荧光显微镜观察,荧光显微镜在实验室普及,但不足的是必须采集叶片或动物切片进行观察,对培养的标本进行破坏,无法进行活体观察。

荧光蛋白激发光源观察动植物荧光蛋白GFP的3种方法

 

3)紫外光源观察

采用紫外线灯(又叫黑光灯)观察也非常方便,但如果观察植物,植物叶片的叶绿色在紫外线灯下也会发出荧光,对gfp发出的荧光也会产生干扰,另外,标本长时间在紫外光源照射下对GFP标本组织也会造成破坏。365nm的紫外线灯照射植物叶片,叶片的叶绿素在紫外线作用下会发红光,而GFP荧光蛋白在紫外线激发下发出的是510nm青绿色的荧光,红色和青绿色混在一起,会变成黄色,所以,用紫外光源照射叶片上黄色部位有可能就是GFP表达的位置

荧光蛋白激发光源观察动植物荧光蛋白GFP的3种方法

 

三种方法中激发光源是最直接,最方便的,同时效果也很好。激发光源ULV450为小型手电筒样式,锂电池供电,轻巧容易携带。根据GFP的荧光特性,我们可以用激发光源ULV450检测转绿色荧光蛋白(GFP)基因、红色荧光蛋白(DsRed);检测基因植物:水稻、小麦、玉米、大豆、棉花、拟南芥;检测转GFP、DsRed基因动物:小鼠、兔子、猴子等;检测转GFP、DsRed基因微生物:细菌、真菌、酵母等检测GFP、DsRed基因组织特异性表达;

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