荧光蛋白激发的日常用途

荧光蛋白激发的日常用途

时间:2020-11-30 编辑:荧鸿科技

荧光蛋白+激发光源在生物基因研究中发挥着巨大的作用,荧光蛋白在激发光源的激发下发出荧光,使得研究效果更直观。以下为荧光蛋白的10个日常用途,本文为深圳荧鸿摘录,仅供参考。关于激发光源选择,请咨询深圳荧鸿:0755-89233889.

(1) Localization:可以放在目的基因的N端,也可以放在目的基因的C端。这样的构建方式可以帮助我们观察到目的基因是什么时候开始表达以及在哪里表达;

(2) Transcription reporter:将荧光蛋白放在待研究启动子的后面,可以很好的观察或者验证该启动子在特定细胞中的启动活性;

(3) FRET(Frster Resonance Energy Transfer):用来研究两个不同的蛋白或者用一个蛋白的两个不同结构域之间的相互作用关系。通常是使用激发/发射光谱有重叠的两个荧光蛋白。目前蛋白-蛋白相互作用研究中最广泛应用的FRET对就是青色荧光蛋白(cyan fluorescent protein, CFP)、黄色荧光蛋白(yellow fluorescent protein, YFP)。

(4) Split EGFP:FRET的另一种实现方法,同样被用来研究蛋白与蛋白的相互作用。具体是将EGFP分割成两部分,分别融合到两个蛋白,当两个蛋白靠近时,EGFP的两部分蛋白开始折叠,成熟到发光。

(5) Biosensors:用来监测细胞内小生物分子或其他生理过程,比如AAV载体中的钙指示剂。

(6) Optogenetics:是研究人员使用一种新的光控方法选择并打开了某种生物的一类细胞。光遗传技术–21世纪神经科学领域最引人注目的革新,其主要原理是首先采用基因操作技术将光感基因(如ChR2,eBR,NaHR3.0,Arch或OptoXR等)转入到神经系统中特定类型的细胞中进行特殊离子通道或GPCR的表达。光感离子通道在不同波长的光照刺激下会分别对阳离子或者阴离子的通过产生选择性,从而造成细胞膜两边的膜电位发生变化,达到对细胞选择性地兴奋或者抑制的目的。

(7) Chemogenetics:利用遗传学原理,以化学小分子为工具解决生物的问题,或通过干扰、调节正常生理过程了解蛋白质的功能。

(8) In Vivo Imaging:活体成像系统成像原理包括生物发光与荧光两种技术。生物发光是用荧光素酶基因标记DNA,利用其产生的蛋白酶与相应底物发生生化反应产生生物体内的光信号;而荧光技术则采用荧光报告基因(GFP、RFP)或荧光染料(包括荧光量子点)等新型纳米标记材料进行标记,利用报告基因产生的生物发光、荧光蛋白质或染料产生的荧光就可以形成体内的生物光源。前者是动物体内的自发荧光,不需要激发光源,而后者则需要外界激发光源的激发。

(9) Cell marking/selection:大家做细胞实验,通常都喜欢质粒带有荧光标签比如GFP,有了该荧光标签可以很方便的判断质粒的转染效率。这种情况通常是荧光蛋白由另外一个不同的启动子控制或者由与目的基因相同的启动子控制但是通过IRES连接。

(10) FACS:流式细胞分选技术,可以方便的分选出带有荧光蛋白的细胞,分选出的细胞可以进行培养或其它处理,做更深的研究

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